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细胞核的分级分离实验
点击次数:119 发布时间:2018-07-05

分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀,再用较高的转速,将浮在上清液中的颗粒沉淀下来,从而使各种细胞结构,如细胞核、线粒体等得以分离。

 

实验材料

小白鼠

试剂、试剂盒

蔗糖氯化钙溶液甲苯胺兰染液詹纳斯绿B染液NaCl溶液

仪器、耗材

玻璃匀浆器离心机天平光学显微镜载玻片盖玻片离心管滴管量筒烧杯玻璃漏斗解剖剪镊子

实验步骤

1.  用颈椎脱位的方法处死小白鼠后,迅速剖开腹部取出肝脏,剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中,反复洗涤,尽量除去血污,用滤纸吸去表面的液体。

 

2.  将湿重约1 g 的肝组织放在小平皿中,用量筒量取8 ml 预冷的0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙溶液,先加少量该溶液于平皿中,尽量剪碎肝组织后,再全部加入。

 

3.  剪碎的肝组织倒入匀浆管中,使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中,左手持之,右手将匀浆捣杆垂直插入管中,上下转动研磨3~5次,用3层纱布过滤匀浆液于离心管中,然后制备一张涂片①,做好标记,自然干燥。

 

4.  将装有滤液的离心管配平后,放入普通离心机,以2500 rpm,离心15分钟。

(1)缓缓取上清液,移入高速离心管中,保存于有冰块的烧杯中,待分离线粒体用。

(2)同时涂一张上清液片②做好标记,自然干燥。

(3)余下的沉淀物进行下一步骤。

 

5.  用6 ml 0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化钙溶液悬浮沉淀物,以2500 rpm 离心15分钟弃上清,将残留液体用吸管吹打成悬液,滴一滴于干净的载玻片上,涂片③,自然干燥。

 

6.  将①、②、③涂片用1%甲苯胺兰染色后盖片即可观察。

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