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胎牛血清中蛋白组分
点击次数:195 发布时间:2018-08-23

胎牛血清 (Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候, 通过心脏穿刺采取胎牛血获取的血清, 因其未与外界环境接触,所以血清内 IgG 等免疫因子相对含量较少,适合用于免疫类细胞的培养。

1 胎牛血清与新生牛血清、小牛血清的区别简介

1.1 分类与命名


目前国内对牛血清的分类主要依据牛出生时间和血清采制分离方法命名。1、胎牛血清:八月龄胎牛心脏穿刺取血;2、新生牛血清:出生 14 小时以内新生牛动脉采血 (又可细分为:a. 高级新生牛血清:采血后静置自然析出的血清;b. 标准新生牛血清:c. 经离心分离的血清;d. 普通新生牛血清:融血或微融血的血清);3、小牛血清:出生三月龄小牛动脉采血分离血清;具体时间国内外分类大致相同但略有差异,如国外将小牛血清可以放宽至 12 个月。

1.2 组成成分

这三种类别的血清的主要组成物质,总体没有特别明显差别,只是有一些成分与其生存环境有关,比如,胎牛血清含有丰富的胚胎发育过程中必须的一些生长因子和激素等,绝大部分的物质来自于母体。而小牛血清中的含量则很少,小牛血清含在离开母体后自身产生的一些代谢物质,当然也包括一些生长激素。但是正是这些细微的差距在培养娇贵细胞或要求苛刻的细胞时使得三种血清表现差距明显。

1.3 用途

因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少,所以胎牛血清是品质最高的,常用于干细胞的培养;除了如干细胞之类的比较娇贵的细胞,其余的大部分细胞培养,都可以用新生牛血清培养。月龄较大的小牛血清相对培养效果要差一些,常用于一些易培养的细胞或者肿瘤细胞,还可以作为封闭液、保护液、缓冲液使用。使用内蒙古金源康公司的胎牛或者新生牛血清对 BHK-21/Vero/Marc145/ST/PK-15 等多种细胞进行连续传代培养时,胎牛血清以及新生牛血清均有较好的促细胞生长的效果,胎牛血清和新生牛血清对群体性细胞培养时效果差别不明显,但是对单细胞克隆培养时胎牛血清优于新生牛血清。

2 蛋白组成成分区别

2.1 血清蛋白组成

一说起胎牛血清与新生牛血清的差异时,大家基本都会提到促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,这些物质比较笼统,且与牛源地、生存环境、营养状况等有一定联系,研究其差异性比较困难。但是有一点可以肯定,胎牛血清中的部分功能蛋白与小牛血清中的含量有差别,其中最主要的就是球蛋白的含量有差距。先让我们一起了解血清中蛋白组成:


图 1:牛血清蛋白电泳图及光密度扫描图

电泳时从正极到负极为清蛋白,α球蛋白,β-球蛋白及γ-球蛋白。α球蛋白包括α1-球蛋白,α2-球蛋白,β包括β1-球蛋白和β2-球蛋白。α1-球蛋白:主要是α1 抗胰蛋白酶和α1 酸性糖蛋白。α1 抗胰蛋白酶是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白,α2-球蛋白主要为结合珠蛋白和α2-巨球蛋白。β-球蛋白:以β脂蛋白、转铁蛋白和血红素结合蛋白为主,还包括补体成分。γ-球蛋白主要成分为 IgG,此外还包括 IgM;IgA;IgD;IgE 等。

2.1 牛血清蛋白含量差异

胎牛血清与新生牛血清在蛋白组成上的差异还是很明显的。首先,根据内蒙古金源康生物工程有限公司多年检测经验总结,胎牛血清总蛋白含量(g/dl)约为 2%-4%,新生牛血清约为 3.0%-5.0%,成牛血清则高达 8%-10%.从蛋白含量上也可以初步判断一个血清是否为胎牛或新生牛血清,蛋白含量越高说明牛龄越大,目前检测蛋白含量是内蒙古金源康生物工程有限公司生产时初步检测一项重要指标。

其次,球蛋白尤其是免疫球蛋白的含量是影响胎牛血清与新生牛血清的使用效果的最主要因素。白蛋白是血清中的重要功能蛋白,是血清中有益于细胞培养的重要成分;免疫球蛋白对细胞培养有一定的抑制作用,其在血清中的含量越少越好,通过白蛋白与免疫球蛋白的比值可以判断血清的优劣。

在成年动物的体液中, 免疫球蛋白含量最高的是血清。而正如已经知道的那样, 母源免疫球蛋白不能通过牛的胎盘屏障, 所以胎牛血清中没有 Ig,小牛从初乳中获得免疫球蛋白。正是考虑到这一点,新生牛血清来源于未进食的新生牛,最大限度的减少免疫球蛋白的产生。但是母牛有诸如病毒等传染因子进入时,例如腹泻病毒等感染胎牛,胎牛血清中可发现免疫球蛋白,所以胎牛血清不一定完全不含免疫球蛋白。


图 2:成牛血清与成人血清蛋白含量差异

从图 2 成牛血清与成人血清蛋白组份组成表可以看出,血清中球蛋白含量是很高的,其中γ-球蛋白含量较α球蛋白、β-球蛋白都要高。IgG 又是γ-球蛋白的主要成分,因此检测 IgG 含量是判断是否为胎牛血清的一项重要指标,胎牛血清一般 IgG≤5ug/ml。
 

 

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