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产品名称:SUM159PT细胞 人乳腺癌细胞

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SUM159PT细胞 人乳腺癌细胞的详细资料:

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培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污 染、病毒污染以及非细胞污染,那么他们污染细胞的特点分别是什么呢?怎样能够减少污染现象的发生?

1-细菌 细菌污染常见的有大肠杆菌,葡萄球菌等。细菌污染较易发现,在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,培养液一般会在短时间内变黄,有 时静置的培养液不混,稍加震荡会有很多混浊物漂起。显微镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒物漂浮,有时在细胞表面及周围有大量 细菌存在,细胞停止生长并有中毒表现。

处理:①在培养液中加入相应的抗生素,能够预防绝大多数的细菌污染。

2-真菌 真菌污染是细胞培养过程中zui常见的一种,尤其梅雨季节快要到了,进行细胞培养时更易污染。污染细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉 菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见,较易被发现,短期内培养液 多不混浊,倒置显微镜下可见于细胞之间纵横交错穿行的丝状、管状、及树枝状菌丝,并悬浮飘荡在培养液中。 很多菌丝在高倍镜可见到有链状排列的菌珠;念珠菌或酵母菌形态呈卵形,散在细胞周边和细胞之间生长。镜下看时,要将培养瓶用酒 精棉球擦干净,以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。 真菌污染后,细胞生长变慢,但zui后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是 一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。

3-支原体 支原体的大小介于细菌和病毒之间,是一种独立生活的微生物。对热敏感,对一般抗生素不敏感。支原体的形态多变,多吸附在细胞表 面和细胞之间。电镜下观察,中心有高密度的密集颗粒,横断面与细胞微绒毛相似。 因国内的血清大多数都没有做支原体阴性检测,而支原体又是牛血清中zui常见的微生物之一。支原体污染细胞后,培养液轻微发生混 浊.但细胞变化不显著,随着细胞的培养会慢慢死亡。

7-非同种细胞污染 即细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前,世界上 已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效。非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培 养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。 污染是细胞培养的大敌,预防和避免污染是成功培养细胞的关键之一。危机意识要贯彻实验的始终,否则不仅浪费时间,而且浪费人 力、物力,甚至造成无法弥补的损失。 分析了7种常见的细胞污染物类型与相应的防治方法,但当体外培养细胞受到严重污染时,有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此,防 止污染,预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个SUM159PT细胞*人乳腺癌细胞培养的始终,才能将发生污染的可能性降到zui小程 度。

1. 从物品、用品消毒灭菌着手 1-1细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。注意,在无菌过滤操作 中,随着滤过体积的增大,滤膜破损的可能性增加,故应选择zui后过滤的液体进行检测。

1-2定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作:75%的酒精搽拭培养箱后,使用可移动的紫外灯至少消毒 30min,加入高压灭菌过的超 纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml的饱和硫酸铜加3L灭菌超纯水混合成硫酸铜溶液加入水槽中。

1. 添加抗生素 各种抗生素性质不同,对各种微生物的作用也不同,联合应用比单用效果好,预防性应用比污染后使用好。但反复使用抗生素会使微生 物产生耐药性,且对细胞本身也有一定影响,因此为避免诱导抗药细菌,应定期更换培养系统中的抗生素,或尽可能不用抗生素处理。

1. 从操作者做起 3-1进无菌室前要彻底洗手,按规定穿隔离衣。开始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

3-2操作者动作要轻,安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意,金属器械不能在火焰中长时间烧 灼,以防退火;烧过的器械要冷却后才能使用;已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼,因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦 后会产生有害物质,吸管再用时会将其带到培养液中;胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长,以免烧焦产生 有毒气体,危害培养细胞,同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。

3-3操作时尽量不要谈话,咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。

3-4使用培养液前不宜过早开瓶,开瓶后的培养液应保持斜位,避免直立,以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口, 培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。

3-5操作完毕后应整理好工作台面,用消毒水浸泡的纱布擦拭台面。

3-6吸取培养液、细胞悬液时,应专管专用,一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去,以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉 污染。

1. 防止细胞交叉污染 所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备,一旦怀疑发生交叉污染,可做细胞遗传学方面的鉴定,如发 现原有的细胞遗传物发生改变,可以复苏早期冻存的细胞使用。重要细胞系(株)的传代工作应由两人独立进行。

1. 无菌室的彻底消毒

5-1新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室。使用前应稀释即配即用。新洁尔灭和酒精相比,zui大的优点是便宜,因为新洁尔灭500ml只需5元,而 且可以稀释50倍用,而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。

5-2甲醛熏蒸法:甲醛是一种广谱灭菌剂菌,其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。甲醛价廉,熏蒸消毒时不 损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。

其主要用法为:

(a)熏蒸消毒:每立方米空间甲醛用量为10~15毫升,熏蒸消毒时应密闭门窗封闭至少4h以上。高锰酸钾加40%甲醛(1:1)混合后放入 一开发容器中,立即可见白色甲醛烟雾。消毒后可放入25%氨水蒸发中和刺激气味。氨水用量为所用甲醛水溶液的一半,时间为30分钟。 注意!甲醛气体毒性非常强,所以操作时一定需带上防毒面具。

(b)自然挥发: 将较大量的甲醛水溶液放入一敞开容器中,室内温度保持在18摄氏度以上,同时室内喷水以保持相对湿度在70%以上, 经16小时可达到室内消毒的目的。

支原体污染检测(荧光染色法):DNA和与DNA特异性结合的荧光染料结合,使得支原体的DNA着色,然后用荧光显微镜观察。镜下支原体 为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。

解决:

1)抗生素排除法:支原体污染预防比解决好。如果不小心污染后,可加入高浓度抗生素(常规使用的5倍浓度)作用24-48小时,再换入 常规培养液,但该法不保证有效。推荐用量:庆大霉素 200μg/ml ,四环素10μg/ml ,卡那霉素50μg/ml 。

2)加温除菌:支原体不耐热,可以对支原体污染的细胞热处理除菌。因高温对细胞本身也会产生一定影响,故热处理前需先进行预实 验,确定对细胞影响zui小而能zui大程度的杀死支原体的时间。

4-黑胶虫 黑胶虫的存在目前尚有争议,其在低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,对细胞生长状态不会有 明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。

5-原虫 培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不 好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不 会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,zui终形成恶性循环。

6-病毒 组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染。目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。 尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的。因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。

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